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RB51

 

Nueva vacuna contra la brucelosis bovina, obtenida a partir de una cepa rugosa de B. abortus

 

Los rebrotes de brucelosis bovina en áreas geográficas limitadas, con importantes tasas de incidencia, que hacen difícil su control únicamente con los métodos establecidos de diagnóstico serológico y sacrificio de los reaccionantes positivos, permiten que se plantee la posibilidad de autorizar la vacunación en esas zonas. Hasta hace pocos años las vacunas disponibles contra la brucelosis inducían anticuerpos en los animales vacunados que podían interferir más tarde con el diagnóstico de la enfermedad, según la forma en que se hubiera practicado la vacunación. La aparición de una nueva vacuna denominada RB51, obtenida a partir de una cepa rugosa, logra una protección efectiva sin inducir anticuerpos que interfieran con el diagnóstico.

 

En los animales la brucelosis es producida por las que han sido catalogadas como 6 especies diferentes del género Brucella. B. melitensis, B. abortus, B. suis, B. canis, B. ovis y B. neotomae. 

La brucelosis afecta a todas las especies domésticas, numerosos animales silvestres y al hombre, pero las distintas especies de Brucella se han adaptado a hospedadores específicos entre los animales domésticos. Así la brucelosis bovina es producida por B. abortus, la porcina por B. suis y la ovina y caprina por B. melitensis. Las enzootias típicas son el resultado de este tipo de interacción germen-hospedador.

El "salto" (migración) de una especie de brucela a otra especie animal, se caracteriza porque no se da en ésta la diseminación posterior, con su correspondiente curso enzoótico, o se presenta sólo en raras ocasiones.

El hombre es susceptible a la infección por B. melitensis, B. abortus, B. suis y B. canis. No se han comprobado casos humanos por B. ovis, responsable de la epididimitis infecciosa de los moruecos ni por B. neotomae, sólo detectada en la rata del desierto Neotoma lepida.

 

Colonias lisas y rugosas

Si se cultiva Brucella en medios sólidos, sus colonias pueden aparecer con morfología  lisa o rugosa y algunas muestran un fenotipo mucoide. Las colonias lisas tienen la capacidad de volverse rugosas espontáneamente y algunas cepas rugosas también pueden revertir a la forma lisa. La morfología lisa o rugosa de las colonias de Brucella depende de la composición de las moléculas de lipopolisacárido (LPS) de la pared externa de la bacteria. Las lisas tienen una cadena O de polisacárido compuesta de un homopolímero de N-formil-perosamina (N-formil-4-amino-4,6-didesoxi-manosa) mientras que en las rugosas la molécula de LPS carece de cadena O.  La cadena O de N-formilperosamina desempeña un papel fundamental en el diagnóstico serológico de la brucelosis ya que es un antígeno inmunodominante que induce la formación de anticuerpos en la mayoría de los animales expuestos a las cepas lisas de brucela y prácticamente todos los métodos de diagnóstico serológico de brucelosis, de uso habitual, se basan en la detección de anticuerpos de la cadena O.

 

Tests serológicos

Según la OIE, debe recalcarse que la seroaglutinación no es adecuada para la detección de la brucelosis bovina y su empleo para propósitos de comercio internacional debe ser descartado. A pesar de esto, muchos países, incluida la Unión Europea, requieren aún que los animales no reaccionen al test de la seroaglutinación (SAT) en un nivel que exceda las 30 UI para el comercio internacional y así lo recoge, consecuentemente, también la legislación española en su "Real Decreto 1716/2000, de 13 de octubre, sobre normas sanitarias para el intercambio intracomunitario de animales de las especies bovina y porcina" que incorpora al ordenamiento jurídico interno varias Directivas europeas sobre el control veterinario de los intercambios intracomunitarios de estos animales, dejando también la posibilidad de emplear otras pruebas serólogicas autorizadas.

La Unión Europea también establece un nivel superior para la fijación de complemento de 20 UIFC (Unidades Internacionales de Fijación de Complemento). La FC es más sensible y específica y tiene un sistema estandarizado de unidades. Debe recomendarse su empleo como prueba de confirmación. El rendimiento de los ELISAs es comparable al de la FC y como técnicamente son más fáciles de realizar, pueden ser preferidos en muchos laboratorios como pruebas de chequeo y de confirmación.

Para el control de la brucelosis suele ser necesario en primer lugar el chequeo con un método simple y rápido, de gran sensibilidad y posteriormente se aplica sobre las muestras positivas un segundo método, más específico, de confirmación. La prueba del antígeno brucelar tamponado, el Rosa de Bengala, la prueba de aglutinación tamponada  en placa o el ELISA, son métodos adecuados para el chequeo. Las muestras reaccionantes positivas, deben ser comprobadas luego con un método de confirmación adecuado.

La legislación española, en el "Real Decreto 2611/1996, de 20 de diciembre, por el que se regulan los programas nacionales de erradicación de enfermedades de los animales", en su Anexo 2, sobre el diagnóstico de la brucelosis bovina, contempla las pruebas de la seroaglutinación, la fijación del complemento, el antígeno brucelar tamponado coloreado con rosa bengala, la prueba del anillo y el ELISA. Fija como Laboratorio Nacional de Referencia el de Sanidad y Producción Animal de Santa Fe (Granada), perteneciente al Ministerio de Agricultura Pesca y Alimentación.

 

Vacunación

Se puede prevenir la infección y, por consiguiente, la aparición de la enfermedad, por medio de la vacunación. La normativa española, en el Real Decreto 2611/1996, antes mencionado, prohíbe en su artículo 14 la vacunación contra la brucelosis bovina. No obstante, en el apartado 4 del mismo artículo, establece una excepción: "cuando la situación epidemiológica de la enfermedad valorada en cada región así lo aconseje, se podrá autorizar la vacunación de bovinos de edad comprendida entre tres y seis meses, en determinadas áreas o explotaciones con la vacuna B-19 u otra vacuna oficialmente aprobada."

Como norma general, la inducción de una respuesta inmune protectora, efectiva y duradera en el caso de patógenos intracelulares facultativos (como es el caso de la brucela) requiere el uso de vacunas vivas o, en algunos casos, el empleo de varias inoculaciones de antígenos protectores adecuados, en presencia de coadyuvantes, que favorecen la inducción de inmunidad mediada por células. Esto último es un componente fundamental de la respuesta inmune protectora en la infección con cepas lisas de Brucella spp., aunque los anticuerpos frente la cadena O también desempeñan un papel más o menos importante en la protección, dependiendo de la especie animal involucrada.

B. abortus cepa 19 y B. mellitensis Rev-1 son vacunas vivas que se basan en cepas lisas atenuadas. Ambas pueden inducir grados variables de protección y ambas, también, estimulan la producción de anticuerpos frente a la cadena O lisa.

La cepa 19 se aisló inicialmente como una cepa virulenta de la leche de una vaca Jersey en 1923 y se dejó a temperatura ambiente en un laboratorio durante un año. Fue descrita por J.M. Buck en 1930. Es una cepa atenuada, de morfología lisa, incapaz de crecer en presencia de eritritol. Aunque es de baja virulencia para el ganado, la vacunación subcutánea del bovino gestante puede llevar al aborto, pero es un caso más bien raro, oscilando entre el 1 y el 2,5% en condiciones de campo. Algunas bacterias de la cepa 19 aisladas de abortos son capaces de crecer en presencia de eritritol.

 La vacuna Rev.1 es una cepa viva atenuada de B. melitensis aislada a partir de una cepa virulenta que se tornó dependiente de estreptomicina para su crecimiento pero que perdió esta característica al seguir cultivándose. Protege al ovino y caprino contra la infección por B. melitensis y al morueco contra la infección por B. ovis. Es una vacuna atenuada pero conserva cierta virulencia. Según la dosis administrada, durante la gestación, los abortos pueden ser frecuentes. En los moruecos la vacuna es aparentemente avirulenta o de baja virulencia. Es una cepa lisa y por lo tanto induce serología positiva que interfiere con el diagnóstico. Se ha investigado el empleo de la Rev. 1 en el vacuno y los resultados indican que da una buena protección, mejor que la de la cepa 19.

La cepa de B. abortus 45/20, es una cepa rugosa con muy pequeña o ninguna capacidad de inducir anticuerpos anti-cadena O. Se desarrolló inicialmente como una vacuna viva, pero se desechó en esa forma por su tendencia a revertir hacia la virulencia y posteriormente se empleó, con cierto éxito, como vacuna muerta con adyuvante oleoso. Su capacidad de inducir una protección significativa frente a B. abortus indica que las formas rugosas se pueden emplear para inducir una respuesta inmune protectora, evitando, de este modo, los problemas diagnósticos asociados a las cepas lisas.

 

RB51

Fue seleccionada a partir del crecimiento de la cepa de B. abortus 2308 en presencia de rifampicina. Se empleó para denominarla la "R" por ser una cepa rugosa, la "B" por Brucella y "51" no indica el número de pases necesarios para obtenerla sino que corresponde a una nomenclatura interna del laboratorio que la desarrolló. La cepa RB51 está desprovista de la cadena O, es rugosa y muy estable tras numerosos pases in vitro e in vivo a través de varias especies animales. Dado que carece de cadena O, no induce anticuerpos anti-O de forma detectable por los métodos serológicos convencionales o el ELISA, independientemente de la edad, dosis o frecuencia de las inoculaciones. La cepa RB51 es una cepa atenuada, como lo indican los ensayos efectuados en ratón, cobayo, caprino y vacuno, de los cuales se elimina en un espacio de tiempo relativamente corto con capacidad abortiva pequeña o nula. Cuando se emplea en protocolos de vacunación de una sola dosis, su capacidad protectora en el vacuno es similar a la de la cepa 19. Recientes experimentos de campo, llevados a cabo en áreas de alta y baja prevalencia de brucelosis, indican que la inmunidad inducida por la RB51 en el bovino (al menos un año tras la vacunación) es semejante o mejor que la inducida por la cepa 19. El ensayo en ratón indica que la respuesta protectora inducida por la RB51 está mediada únicamente por las células T, puesto que la transferencia a otro animal de anticuerpos inducidos por la RB51 no protege, mientras que la de células T sí lo hace. Un trabajo reciente, que se presentó en la quincuagésima conferencia sobre investigación de brucelosis, en Chicago, en noviembre de 1997, sugiere que la vacunación con RB51 induce la formación de células T citotóxicas específicas, capaces de destruir los macrófagos infectados con Brucella. Puede distinguirse de la B. abortus aislada en el campo por métodos moleculares. Los estudios en el ratón indican que la cepa RB51 puede proteger contra las infecciones por B.abortus, B.melitensis, B.suis y B.ovis. Los trabajos en marcha con varias especies animales confirman una actividad protectora excelente en cerdos contra la infección por B. suis en condiciones de campo (Lord, et al., 1998) y ha demostrado que la RB51 puede proteger hasta al 93% de las cabras vacunadas, contra la infección por B. melitensis. Los resultados preliminares en el ovino sugieren que la RB51 no induce una inmunidad protectora en esta especie cuando se usa como dosis única; siendo necesarios más estudios.

Tras la vacunación con RB51, todas las especies chequeadas  permanecieron serológicamente negativas en todas las pruebas serológicas convencionales de brucelosis. Actualmente se han vacunado más de 6 millones de terneras por vía subcutánea con la dosis recomendada de 1 -3.4 x 10 10  microorganismos, sin efectos deletéreos. Existen observaciones no publicadas sobre la eficacia protectora que sugieren que la inmunización debe comenzar en animales “no” menores de 4 meses. El bovino gestante se puede vacunar con seguridad por vía subcutánea con 10 9 microorganismos de RB51, sin que se produzca aborto o placentitis. La inoculación intravenosa de bovino gestante con 10 10 microorganismos provocó infección placentaria y fetal pero no aborto, lo que sugiere que la vacunación del bovino adulto no gestante con una dosis completa, debería ser segura. Sin embargo, informes no publicados de la Colorado Serum Company, que fabrica la vacuna en U.S.A. indican que la vacunación de bovino gestante con una dosis reducida de (1x 109) de la cepa RB51 puede dar abortos en un 0.5% de los vacunados y, por lo tanto, la vacunación de hembras gestantes debe ser evitada o empleada solo en áreas de alta incidencia al comienzo del programa de erradicación.

Desde 1996, la cepa RB51 de B. abortus es la vacuna oficial en USA para la profilaxis de la brucelosis en el ganado bovino y el empleo de la cepa 19 ha sido prohibido. Otros países donde la vacuna ha recibido aprobación oficial y se emplea actualmente son: Argentina, Chile, Colombia, Costa Rica, México, Paraguay y Venezuela. Cada país usa métodos ligeramente diferentes para administrar la vacuna. En USA se vacunan las terneras por vía subcutánea entre 4 y 12 meses de edad por vía subcutánea con una dosis de 1-3.4 x 1010 microorganismos viables de la cepa RB51. La vacunación de los mayores de 12 meses se lleva a cabo sólo bajo autorización del Estado o de los funcionarios federales de Sanidad Animal y la dosis recomendada es de 1 x 109

En otros países se recomienda vacunar las terneras de 4-12 meses de edad con una dosis de 1-3.4 x 1010 y revacunación a partir de los 12 meses con una dosis similar para evitar interferencias con la posible inmunidad maternal y como refuerzo. La experiencia de campo indica que la vacunación de hembras gestantes puede inducir un pequeño porcentaje de abortos, en particular si los animales no se han vacunado como terneras. Sin embargo, parece que la RB51 tiene menor potencial abortivo que la cepa 19. La vacuna se puede aplicar varias veces si se quiere, sin inducir anticuerpos reactivos en tests serológicos tanto si se emplean células completas como el antígeno liso LPS.

 La administración oral de la RB51 a ratones y bovinos ha inducido también inmunidad protectora, abriendo así un campo de estudio para la inmunización de la fauna salvaje.

 

Biopeligrosidad

 Parece que la cepa RB51 no tenga, o en un grado muy pequeño, virulencia para las personas con un sistema inmunitario normal, ya que no ha sido descrita oficialmente ninguna infección humana aunque se han producido numerosas inoculaciones accidentales por pinchazos de agujas al manipularla y algunos autores han considerado que encierra potencial para un posible desarrollo de una vacuna humana. Sin embargo sí se han observado reacciones de hipersensibilidad que aparecieron en algunas personas unas pocas horas tras la inoculación accidental. Dado que la cepa RB51 es muy sensible a la tetraciclina, se ha recomendado emplearla de forma preventiva en las inoculaciones accidentales.

La OIE en su manual de estándares para diagnósticos y vacunas dice al respecto que: “La cepa 19 de Brucella abortus, aunque atenuada es aún capaz de provocar enfermedad en los humanos. Los cultivos celulares y las suspensiones deben manejarse bajo las condiciones adecuadas de contención de biopeligrosidad. La reconstitución y subsecuente manejo de la vacuna reconstituida debe realizarse con cuidado de evitar inoculaciones accidentales o contaminación en los ojos o la piel. Los residuos de vacuna y el equipo de inyección debe descontaminarse con un desinfectante adecuado (un preparado fenólico, yodóforo o aldehídico) a la concentración recomendada y se deben seguir las indicaciones del médico en caso de exposición accidental.” Sobre la RB51 dice que:  “No se dispone de información suficiente para valorar la virulencia de la cepa RB51 de Brucella abortus para los humanos, no obstante, no se han descrito infecciones accidentales. Es recomendable manejar la cepa RB51 con las mismas precauciones que la 19. La cepa RB51 de Brucella abortus es muy sensible a las tetraciclinas y en los casos de inoculación accidental se debería considerar el tratamiento preventivo con este antibiótico.”

 

 

VetTek

Veterinary Technologies Corporation, (http://www.vettek.com) Compañía Estadounidense de biotecnología en el campo del desarrollo de vacunas y reactivos para diagnóstico, fundada en 1993 y con los derechos sobre la marca registrada RB51 hace las siguientes recomendaciones prácticas sobre la aplicación de la vacuna.

Resumen de recomendaciones de uso de la cepa RB51

En EEUU se recomienda vacunar todas las terneras con la dosis completa (10-34 miles de millones de bacterias vivas en 2 ml) entre 4 -12 meses de edad vía subcutánea. Los adultos se pueden revacunar con una dosis reducida (mil millones de bacterias vivas). Sin embargo, estas recomendaciones son para las condiciones imperantes en un país en que prácticamente se alcanzó la erradicación y la incidencia de la enfermedad es baja. En países con incidencia más alta las recomendaciones pueden ser distintas. En general recomendaríamos:

  • Vacunar todas las terneras a la edad de 4 - 10 meses de edad con dosis completa subcutáneamente. La edad óptima sería entre 5 -8 meses.
  • Los machos no se vacunan.
  • Revacunar a los 12-16 meses de edad o antes del encaste (unas 2-3 semanas antes de poner con el toro o inseminación). Esto aumenta la inmunidad en los animales. Mientras más severo el problema de la brucelosis más recomendable es la revacunación. Animales sobre 12 meses de edad se pueden revacunar con la dosis completa o reducida. Dependiendo de la severidad de la situación, los animales revacunados pueden revacunarse nuevamente; esperar por lo menos 6 meses desde la última revacunación.
  • Es mejor evitar la vacunación de animales preñados ya que existe un pequeño riesgo de aborto. El riesgo de aborto debería ser más alto con la dosis completa.
  • Se pueden revacunar con cepa RB51 animales que fueron vacunados previamente con cepa 19. Si la vacunación con cepa 19 indujo seropositividad, la vacunación con RB51 no eliminará esta reacción.
Qué hacer con un predio con alta incidencia de Brucelosis con abortos. En este caso, se recomendaría vacunar todas las hembras del predio (incluso los animales preñados) y luego seguir con el programa recomendado anteriormente. La incidencia de abortos debido a la infección bajará después de la vacunación.

 

 

BIBLIOGRAFÍA

BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA

 

 

Sindicato de Veterinarios de León, febrero de 2002.
http://www.pagina.de/sivele

11-05-2002

La Junta comienza la vacunación contra la brucelosis con la RB-51

La Junta ha dado inicio la campaña de vacunación contra la brucelosis con la RB-51 en Ocejo de la Peña y Ferreras del Puerto. La próxima semana la campaña continuará por el resto de las explotaciones de la Montaña Oriental. Después de más de un año de lucha por parte de los ganaderos y el sindicato agrario Coag para implantar la vacuna RB-51 se abre una nueva etapa en la lucha contra la brucelosis, que ya se ha llevado más de 4.000 reses en toda esta montaña leonesa. Se vacunarán todas las hembras desde los cuatro meses y, transcurridos 12 meses, habrá una revacunación, mientras que los machos no se vacunan.
OCEJO. José María Campos

Corresponsal de Diario de León
La Junta de Castilla y León ha comenzado la campaña de vacunación con RB-51 en la Montaña Oriental leonesa a través de la Unidad Veterinaria de Cistierna. La primeras vacunas se aplicaron a dos explotaciones de la localidad de Ocejo de la Peña pertenecientes al Ayuntamiento de Cistierna. La próxima semana la campaña de vacunación continuará por el resto de las explotaciones agrarias de toda la Montaña Oriental. La RB-51 es una vacuna viva y no induce anticuerpos que interfieren en el diagnóstico.
Se vacunaran todas las terneras con edades superiores a los 4 meses con una dosis subcutánea. Una vez finalizada esta campaña se volverá a realizar una nueva vacunación transcurridos doce meses desde la aplicación de la última vacuna de RB-51. Sin embargo, se continuará con los sangrados de los animales para ir conociendo la respuesta de la vacuna. Además se recomienda la no vacunación de los animales preñados ya que existe un riesgo de aborto no obstante algunos ganaderos aceptaron vacunar a los animales preñados de sus explotaciones.
Una de las preguntas más hechas por los ganaderos es por qué no se vacunan a los machos. Los ganaderos sienten la preocupación de que estos pueden de nuevo infectar de brucelosis al resto de los animales. Debido a esta decisión se deja la puerta abierta a la inseminación artificial que elimina todos los riesgos de contagio.
Nueva época
La campaña de vacunación con la RB-51 abre una nueva etapa en la lucha de la enfermedad de la brucelosis que en dos años se ha llevado en esta zona a más de 4000 reses.
El fracaso de las campaña de saneamiento que hasta ahora había aplicado la Junta de Castilla y León, junto con la vacunación B-19, motivó que hace más de seis meses los ganaderos de esta montaña y el sindicato Coag iniciasen diversas movilizaciones en León y Valladolid para exigir a la Junta la vacunación con RB-51.
La curiosidad de esta campaña ha sido ver la falta de medios de la Junta. Los veterinarios carecían de neveras eléctrica de cadena de frío para conservar las vacunas, con lo que han tenido que utilizar como sustituto de las neveras eléctricas unas neveras «de playa», hasta que lleguen los equipos precisos.

 

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